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法医DNA鉴定常见问题解答

1.  遗传分析仪对于实验室的环境条件有什么具体要求?

    主要有两个方面:一是室温。室温应该稳定在20-25摄氏度,在仪器运行期间室温的波动应该小于2摄氏度,放置仪器的房间应该配备冷暖空调。二是洁净度。放置仪器的房间窗户应该是封闭的,进出放置仪器的房间要有缓冲区域,以减少室内的灰尘。对于空气污染严重的城市,放置仪器的房间中还应该配备加湿器及空气净化器。

2.  为遗传分析仪配备UPS有什么好处?

    由于UPS在断电后可以由电池供电,所以在断电后还可以继续使用仪器。另外,UPS还有稳压、滤波的功能,可以保证实验结果的稳定、可靠,避免由于外界不稳定电源引起的仪器部件损坏。

3.  应该配备什么规格的UPS

    推荐配备在线型的UPS310配备功率为3KVA31003130系列配备功率为6KVA

4.  对地线有什么要求?

    地线应该由专业人员安装并测试合格,地线阻抗<4Ω,中线对地线电压<3V

5.  正确的开机、关机顺序是怎样的?

    开机顺序是:首先开启控制仪器的电脑,然后开启仪器主机,等仪器自检完成、绿灯亮后,再开启数据收集软件。关机顺序是:首先关闭数据收集软件,然后关闭仪器主机,最后关闭电脑。

6.  毛细管可以使用多少次?

    至少可以使用一百次。

7.  POP胶在仪器上可以放置多久?

    在4°C的储存条件下,POP胶在产品包装上所标注的过期日期之前都能保持最佳性能。在室温下,POP胶的最佳性能可以保持一周。所以,POP胶安装到仪器上以后,推荐每周更换一次。

8.  电泳缓冲液应该多久更换?

    推荐连续运行24小时后,或者在仪器上放置一周后更换新鲜配制的缓冲液。以哪个条件先达到为准。

9.  甲酰胺应该怎么保存?

    推荐1 mL分装,在-20°C结冰保存。每次只拿出1管使用,避免反复冻融。

10.  Chelex的配制需要注意那些方面?

    根据目前中国大多数实验室的实际情况,受实验用水的质量限制,推荐按每次检验的实际消耗量配制,用多少配多少。不推荐一次配制很大的体积,使用很长时间。

11.  怎样报修?

      AB公司的客户服务中心负责接受客户的任何售后服务相关问题,包括硬件维修问题和应用问题。中国地区客户服务中心的联系方式是:

    免费电话: 8008100497-456

    电话:     010-64106608-456

    传真:     010-64106617

      email    abcnservice@appliedbiosystems.com

    报修时请提供以下信息:单位名称,联系人姓名,电话,仪器型号,序列号,故障现象。

12.  310开机正常,但是Data collection软件和仪器连接不上,怎么办?

    打开Data collection软件,选择菜单项windowPreferences,选择General Settings页,在Communication Port选择Com 1,点击OK

13.  控制遗传分析仪主机的电脑在维护中要注意哪些方面?

    不要更改计算机名,不要更改网卡IP地址的设置,不要安装其它软件。

14.  31003130需要校正autosampler吗?

    不需要。31003130系列遗传分析仪在开机后会自动校正autosampler的位置,不需要用户手动校正。只有310型遗传分析仪才需要用户自己在开机后校正autosampler的位置。

15.  Data Collection软件左下方的状态条,绿色的三角形变为闪烁的红色圆圈,怎么办?

    在仪器的状态窗口(Instrument Status),检查error窗口的错误信息。更正错误后,重启电脑、仪器、软件。

16.  为什么仪器主机要求有良好的散热?

    室温过高时,仪器会自我保护而停止收集数据;如果室温还在继续升高,仪器会保护性地关闭激光管。所以为了保证仪器始终正常运行,要求房间的空调运行正常,室温保持在正常范围(20-25摄氏度)内,而且不能堵塞仪器后部的散热出风口,使之保持畅通,出风正常。

17.  3130PDP泵需要多久清洗一次?

    至少一个月清洗一次。

18.  3100的大、小注射器和上、下胶块需要多久清洗一次?

    至少一个月清洗一次。

19.  我需要备份哪些数据?

    需要备份的是数据是后缀为fsa的样品文件。可以从资源管理器中找到它们。

20.  为了节省法医鉴定的成本,能否多次电泳的实验数据共用一个ladder文件?

      Laddel的作用是提供所有等位基因在特定电泳条件下的定位参照。只有当样品中的各种等位基因与ladder中的对应等位基因的电泳定位一致,通过它们之间的比对,才能得出正确的鉴定结论。无论样品还是ladder的电泳定位都受缓冲液、胶、室温等可变因素的明显影响。当这些因素存在差异的时候,即使DNA片段的长度一样,其电泳定位也会不一致。所以,把不同批次电泳的样品和ladder放在一起进行比对,特别是这些电泳的环境因素相差比较大的时候,经常会遇到样品与ladder部分或者完全不能对齐的情况,导致鉴定失败。推荐每次电泳都包含一个ladder

21.  GeneMapper软件是否有仪器和反应故障方面的提示?

    硬件的工作状态看EPT Data页面。它显示温度、电流、电压、激光功率等在整个电泳过程中的变化。除了电流以外,其他3个参数都必须是恒定不变的,在图谱中表现为水平的直线。电流的正常状态是逐渐降低,但是降低的幅度不大。

      PCR反应的好坏看Raw Data页面。正常的数据应当是除了引物峰很高以外,所有产物峰、内标峰和ladder峰都在1000-3000点之间,大片段和小片段的峰高接近一致,比较均衡,峰的宽度前后一致,每个峰的形态都是两侧对称的。

    软件的内容看Info页面。它显示与电泳和数据分析相关的参数设置。从中可以知道软件的使用是否有错误。

22  分子量内标和PCR产物峰都是小片段正常,大片段变宽,怎么处理?

    通常更换新鲜配制的缓冲液就可得到改善。如果无效,则需要考虑提高实验用水的纯度。

23  电泳发现PCR产物的信号随着片段增大迅速降低,300-400碱基的大片段低到几乎没有,请问要怎样优化反应条件才能得到平衡的数据?

    这是因为PCR反应中所加入的DNA量偏高。减少模板DNA的用量,或者减少提取DNA时所使用的样本量,都可以改善数据的平衡。

24  有时候有些数据峰被标记为OL,为什么会这样?怎么处理?

    这种现象有三种可能的原因:

    信号太高,而阈值又被设置得太低。提高阈值可以将杂峰过滤掉,从而减少OL。阈值的定义是平均信号高度的10%。由于最佳信号高度是1000-3000点,推荐的阈值大小是150点。当平均信号高度明显不在此范围内的时候,可以相应改变阈值的大小,以尽量过滤去除杂峰。

    样品的电泳速度不均匀,小片段的电泳速度基本正常,而大片段的电泳速度偏慢,导致大片段峰明显偏离bin的规定,出现OL。建议每两天换缓冲液,每7天换胶,使样品的电泳速率保持均衡。

      Ladder与样品不是同一批次电泳的,而且ladder的电泳环境与样品的明显不一致,导致ladder与样品的等位基因对不齐,出现OL。建议每次电泳都包含一个ladder

25  样品电泳前我从来也不变性,数据一直都非常好。是不是根本就没有必要做变性这一步?

    变性的目的一是DNA双链解离成单链,二是破坏DNA单链内部可能形成的二级结构,使单链保持直线伸展状态,从而使同样长度的DNA片段在电泳中保持同样的速度,形成尖锐的单一峰图。如果不变性,峰图可能变宽、分裂甚至一个等位基因出现两个峰,看起来像两个等位基因。

    为什么有些情况下不变性图谱也正常呢?这是因为我们是用甲酰胺来溶解DNA的,而且POP胶里还含有大量尿素。甲酰胺和尿素都是化学变性剂,可以起到保持DNA单链和伸展状态的作用。

    但是化学变性剂的作用更多的是“保持”而不是“形成”DNA的伸展状态。热变性才是迫使DNA形成伸展状态的100%有效方法。所以PCR产物在电泳前必须要做加热变性。

 

 

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